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T淋巴細(xì)胞基因重排檢測(cè)

IdentiClone™ T-Cell Clonality Assays

【臨床意義】

目前臨床上多數(shù)以形態(tài)學(xué)表征，免疫表型來(lái)作為淋巴瘤分型的主要依據(jù)，然而很多淋巴瘤的表征是十分相似的，這類方法很難準(zhǔn)確鑒別，容易導(dǎo)致誤診。分子診斷技術(shù)對(duì)于判斷淋巴瘤具有獨(dú)特的客觀優(yōu)勢(shì)。淋巴瘤來(lái)源于淋巴細(xì)胞的惡變，惡變后仍然具有淋巴細(xì)胞的基本特征，即仍然有免疫球蛋白（Ig ，B細(xì)胞）或者T細(xì)胞受體（TCR T細(xì)胞）基因重排。PCR技術(shù)的興起使得擴(kuò)增Ig或者TCR基因變得很容易。標(biāo)本來(lái)源包括血液，骨髓，組織和胸腹水，還可用于石蠟固定后的淋巴結(jié)標(biāo)本。

【試劑盒原理】

PCR技術(shù)常被用來(lái)檢測(cè)T細(xì)胞克隆性。本試劑盒引物擴(kuò)增的DNA序列為保守的可變區(qū)（V）和鏈接區(qū)（J）間的序列及多變區(qū)和鏈接區(qū)間的序列。這些保守序列位于V-J區(qū)的兩邊，在B和T淋巴細(xì)胞成熟過(guò)程中，編碼基因重排。B細(xì)胞中，抗原受體基因發(fā)生重排的是免疫球蛋白重鏈和輕鏈，T細(xì)胞中的T受體發(fā)生重排。每個(gè)B細(xì)胞和T細(xì)胞都有獨(dú)特的V-J重排，重排產(chǎn)生單一的長(zhǎng)度和序列。因此，當(dāng)用DNA引物擴(kuò)增正常的或多克隆群體的V-J區(qū)側(cè)翼序列，在預(yù)期范圍內(nèi)，擴(kuò)增產(chǎn)物形成一條鐘型曲線（高斯分布）。聚丙烯酰胺電泳的產(chǎn)物則是彌散狀條帶。高斯分布反映了V-J重排的多樣性。若DNA來(lái)自于克隆性樣本，則在多克隆背景下會(huì)產(chǎn)生一個(gè)或兩個(gè)明顯的擴(kuò)增產(chǎn)物。由于抗原受體基因的多態(tài)性（包含相關(guān)DNA序列的異質(zhì)性群體），很難設(shè)計(jì)出一套引物可以把基因重排V-J區(qū)的側(cè)翼序列全部包括在內(nèi)，N區(qū)的多樣性及體細(xì)胞突變更增加了該區(qū)段序列的多變性。因此，試劑盒設(shè)計(jì)了多管擴(kuò)增Mix，定位多個(gè)FR區(qū)，旨在檢測(cè)出絕大多數(shù)的基因重排。 在擴(kuò)增結(jié)束后，可以通過(guò)聚丙烯酰胺電泳或毛細(xì)管電泳的方法，檢測(cè)擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度，來(lái)分析結(jié)果。

TCRB	TCRG
TCRD

【產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)】

2 唯一商品化試劑，獲得CE認(rèn)證，是細(xì)胞克隆性基因檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”

2 檢測(cè)方法多樣，可通過(guò)聚丙烯凝膠電泳或ABI/毛細(xì)管電泳平臺(tái)進(jìn)行

2 產(chǎn)品性能穩(wěn)定，樣本來(lái)源可以是石蠟包埋組織或切片，外周血，組織塊

2 基于PCR技術(shù)的克隆檢測(cè)，改良的標(biāo)準(zhǔn)化流程

2 最豐富的陽(yáng)性對(duì)照，涵蓋T/B細(xì)胞重排類型

【試劑盒靈敏度分析】

InVivoScribe 公司的 IdentiClone™產(chǎn)品是基于PCR的克隆性檢測(cè)產(chǎn)品。這些標(biāo)準(zhǔn)化的試劑的組分包括陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照，Mix 都是經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了超過(guò)400例的臨床樣本驗(yàn)證，檢測(cè)是在30多個(gè)從BIOMED-2合作組織中挑選出的優(yōu)秀的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)布在白血病領(lǐng)域的權(quán)威期刊Leukemia上。當(dāng)所檢測(cè)的克隆細(xì)胞群低于總體的5%時(shí)，凝膠電泳檢測(cè)的方法所得到的結(jié)果可能不可靠。需要強(qiáng)調(diào)的是，克隆性檢測(cè)的結(jié)果應(yīng)與臨床，病理及免疫學(xué)等方面的數(shù)據(jù)結(jié)合進(jìn)行綜合的判斷。

【結(jié)果示例】

TCRB聚丙烯酰胺凝膠電泳圖 TCRB毛細(xì)管管電泳Gene Scan圖

【訂購(gòu)信息】

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	方法
TCRB克隆性檢測(cè)試劑盒 TCRB克隆性檢測(cè)試劑盒 TCRD克隆性檢測(cè)試劑盒 TCRD克隆性檢測(cè)試劑盒 TCRG克隆性檢測(cè)試劑盒 TCRG克隆性檢測(cè)試劑盒 TCRG克隆性檢測(cè)試劑盒2.0 TCRB+TCRG克隆性檢測(cè)試劑盒 TCRB+TCRG克隆性檢測(cè)試劑盒	9-205-0010 9-205-0011 9-206-0020 9-206-0021 9-207-0020 9-207-0021 9-207-0101 9-200-0010 9-200-0011	電泳法 測(cè)序法 電泳法 測(cè)序法 電泳法 測(cè)序法 測(cè)序法 電泳法 測(cè)序法

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	方法
BCL-1/JH克隆性檢測(cè)試劑盒 BCL-2/JH克隆性檢測(cè)試劑盒 BCL-2/JH克隆性檢測(cè)試劑盒	9-308-0010 9-309-0020 1-309-0051	電泳法 電泳法 測(cè)序法

【相關(guān)文獻(xiàn)索引】

1.Miller, JE, Wilson, SS, Jaye, DJ, Kronenberg, M. An automated semiquantitative B and T cell clonality assay. Mol. Diag. 1999, 4(2):101-117.

2.Van Dongen, JJM et al. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: Report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia 2003, 17(12):2257-2317.

3.Sandberg, Y, van Gastel-Mol, EJ, Verhaaf, B, Lam, KH, van Dongen, JJM, Langerak, AW. BIOMED-2 multiplex immunoglobulin/T-cell receptor polymerase chain reaction protocols can reliably replace Southern Blot analysis in routine clonality diagnostics. J. Mol. Diag. 2005, 7(4):495-503.

4.van Krieken, JHJM, et al. Improved reliability of lymphoma diagnostics via PCR-based clonality testing: report of the BIOMED-2 Concerted Action BHM4-CT98-3936. Leukemia 2007, 21(2):201-206.