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B淋巴細胞基因重排檢測

        IdentiClone™ B-Cell Clonality Assay

   【臨床意義】

     目前臨床上多數(shù)以形態(tài)學表征，免疫表型來作為淋巴瘤分型的主要依據(jù)，然而很多淋巴瘤的表征是十分相似的，這類方法很難準確鑒別，容易導致誤診。分子診斷技術(shù)對于判斷淋巴瘤具有獨特的客觀優(yōu)勢。淋巴瘤來源于淋巴細胞的惡變，惡變后仍然具有淋巴細胞的基本特征，即仍然有免疫球蛋白（Ig ，B細胞）或者T細胞受體（TCR  T細胞）基因重排。PCR技術(shù)的興起使得擴增Ig或者TCR基因變得很容易。標本來源包括血液，骨髓，組織和胸腹水，還可用于石蠟固定后的淋巴結(jié)標本。

    該試劑盒是用于體外診斷的產(chǎn)品，適用于：

 檢測非典型淋巴增生性疾病的克隆

 區(qū)分反應性病變和血液系統(tǒng)惡性腫瘤

 推測成熟的單克隆淋巴增生性疾病演變過程

 為治療后監(jiān)測提供特異性的腫瘤標志物(IGH 基因重排)

 監(jiān)測和評估疾病的復發(fā)

【試劑盒原理】

    PCR技術(shù)常被用來檢測T細胞克隆性。本試劑盒引物擴增的DNA序列為保守的可變區(qū)（V）和鏈接區(qū)（J）間的序列及多變區(qū)和鏈接區(qū)間的序列。這些保守序列位于V-J區(qū)的兩邊，在B和T淋巴細胞成熟過程中，編碼基因重排。B細胞中，抗原受體基因發(fā)生重排的是免疫球蛋白重鏈和輕鏈，T細胞中的T受體發(fā)生重排。每個B細胞和T細胞都有獨特的V-J重排，重排產(chǎn)生單一的長度和序列。因此，當用DNA引物擴增正常的或多克隆群體的V-J區(qū)側(cè)翼序列，在預期范圍內(nèi)，擴增產(chǎn)物形成一條鐘型曲線（高斯分布）。聚丙烯酰胺電泳的產(chǎn)物則是彌散狀條帶。高斯分布反映了V-J重排的多樣性。若DNA來自于克隆性樣本，則在多克隆背景下會產(chǎn)生一個或兩個明顯的擴增產(chǎn)物。由于抗原受體基因的多態(tài)性（包含相關(guān)DNA序列的異質(zhì)性群體），很難設計出一套引物可以把基因重排V-J區(qū)的側(cè)翼序列全部包括在內(nèi)，N區(qū)的多樣性及體細胞突變更增加了該區(qū)段序列的多變性。因此，試劑盒設計了多管擴增Mix，定位多個FR區(qū)，旨在檢測出絕大多數(shù)的基因重排。 在擴增結(jié)束后，可以通過聚丙烯酰胺電泳或毛細管電泳的方法，檢測擴增片段的長度，來分析結(jié)果。

 

IGH	IGK
ICL

 

 

【產(chǎn)品優(yōu)勢】 

  ²  唯一商品化試劑，獲得CE認證，是細胞克隆性基因檢測的“金標準”

²  檢測方法多樣，可通過聚丙烯凝膠電泳或ABI/毛細管電泳平臺進行

²  產(chǎn)品性能穩(wěn)定，樣本來源可以是石蠟包埋組織或切片，外周血，組織塊

²  基于PCR技術(shù)的克隆檢測，改良的標準化流程

²  最豐富的陽性對照，涵蓋T/B細胞重排類型

 

【試劑盒靈敏度分析】

     InVivoScribe 公司的 IdentiClone™產(chǎn)品是基于PCR的克隆性檢測產(chǎn)品。這些標準化的試劑的組分包括陰性對照，陽性對照，Mix 都是經(jīng)過精心優(yōu)化，產(chǎn)品經(jīng)過了超過400例的臨床樣本驗證，檢測是在30多個從BIOMED-2合作組織中挑選出的優(yōu)秀的獨立實驗室進行，實驗結(jié)果發(fā)布在白血病領(lǐng)域的權(quán)威期刊Leukemia上。當所檢測的克隆細胞群低于總體的5%時，凝膠電泳檢測的方法所得到的結(jié)果可能不可靠。需要強調(diào)的是，克隆性檢測的結(jié)果應與臨床，病理及免疫學等方面的數(shù)據(jù)結(jié)合進行綜合的判斷。

     

                                            

   

 

【結(jié)果示例】

            

                    IGH聚丙烯酰胺凝膠電泳圖                                                IGH毛細管管電泳Gene Scan圖

     

【訂購信息】

產(chǎn)品名稱	貨號	方法
IgH克隆性檢測試劑盒 IgH克隆性檢測試劑盒 IgK克隆性檢測試劑盒 IgK克隆性檢測試劑盒 IgL克隆性檢測試劑盒 IgL克隆性檢測試劑盒 IGH + IGK克隆性檢測試劑盒 IGH + IGK克隆性檢測試劑盒	9-101-0020                 9-101-0021 9-102-0020  9-102-0021 9-103-0020  9-103-0021 9-100-0010 9-100-0011	電泳法  測序法  電泳法  測序法  電泳法  測序法  電泳法  測序法

 

【相關(guān)文獻索引】

1.Miller, JE, Wilson, SS, Jaye, DJ, Kronenberg, M. An automated semiquantitative B and T cell clonality assay. Mol.  Diag. 1999, 4(2):101-117.

2.Van Dongen, JJM et al. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: Report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia 2003, 17(12):2257-2317.

3.Sandberg, Y, van Gastel-Mol, EJ, Verhaaf, B, Lam, KH, van Dongen, JJM, Langerak, AW. BIOMED-2 multiplex immunoglobulin/T-cell receptor polymerase chain reaction protocols can reliably replace Southern Blot analysis in routine clonality diagnostics. J. Mol. Diag. 2005, 7(4):495-503.

4.van Krieken, JHJM, et al. Improved reliability of lymphoma diagnostics via PCR-based clonality testing: report of the BIOMED-2 Concerted Action BHM4-CT98-3936. Leukemia 2007, 21(2):201-206.